小鼠神经生长因子（NGF）elisa试剂盒说明书资料文献

本试剂仅供研究使用        目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中神经生长因子（NGF）的含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠神经生长因子（NGF）水平。用纯化的小鼠神经生长因子（NGF）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入小鼠神经生长因子（NGF），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠神经生长因子（NGF）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠神经生长因子（NGF）含量。

试剂盒组成：

注：标准品浓度依次为：400、200、100、50、25、0 pg/mL.

小鼠神经生长因子（NGF）elisa试剂盒说明书资料文献操作步骤

1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。

4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。

5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

小鼠神经生长因子（NGF）elisa试剂盒说明书资料文献计算：

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，   

在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD     

值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释     

倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标     

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值     

代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释     

倍数，即为样品的实际浓度。                 

试剂盒性能：

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15% 。

检测范围：                                             

12.5 pg/mL - 400 pg/mL

灵敏度：                                             

最低检测浓度小于1.0 pg/mL

保存条件及有效期：

1.试剂盒保存： 2-8℃。

2．有效期： 6个月